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2024-01

液相色譜常堵原因分析、如何解決和預(yù)防常堵問(wèn)題

在使用高效液相色譜儀的過(guò)程中，我們最常遇見(jiàn)的問(wèn)題就是“堵”?！岸隆钡谋憩F(xiàn)現(xiàn)象就是壓力升高，直接原因就是流路不暢。下面我們一起來(lái)探究一下HPLC常見(jiàn)堵塞原因有哪些，了解故障發(fā)生的原因，既可以在碰到堵塞故障時(shí)不至于束手無(wú)策，又可以防微杜漸，防患于未然。（下面以Agilent LC 1260 Infinity II為例進(jìn)行討論）

“堵”的原因一般有：

沒(méi)有過(guò)濾好流動(dòng)相。
樣品中有微粒。
細(xì)菌污染。
泵或進(jìn)樣器墊圈產(chǎn)生碎片。
預(yù)柱、保護(hù)柱和分析柱中漏出填料。
毛刺和銼屑進(jìn)入。
流動(dòng)相中的結(jié)晶鹽。
系統(tǒng)中進(jìn)入了其它顆粒性物質(zhì)。
操作不當(dāng)導(dǎo)致。

排查哪個(gè)位置“堵”的方法

絕大多數(shù)情況下，整個(gè)系統(tǒng)只有一個(gè)地方發(fā)生堵塞。查堵的方法是從尾向前逆行分段拆開(kāi)，仔細(xì)觀察壓力數(shù)值，如果某一個(gè)部件（柱子除外）裝上和拆下時(shí)的壓力差別很大，可進(jìn)行變化判斷。至于柱子的堵塞，可以通過(guò)更換同樣規(guī)格的柱子，壓力是否一致來(lái)判斷。

解決液相色譜儀堵塞的方法（包括但不限于以下）

（1）??? 溶劑濾頭：玻璃材質(zhì)的濾頭用30%~35%稀硝酸浸泡2-3小時(shí)（視污染程度延長(zhǎng)浸泡時(shí)間），不可超聲，然后用大量超純水徹底沖洗過(guò)濾頭；金屬材質(zhì)的濾頭可以超聲處理，不可用硝酸浸泡，清潔之后用超純水漂洗干凈。必要時(shí)更換新的。

（2）??? 溶劑管：如果是因?yàn)榫彌_鹽停滯時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致長(zhǎng)菌，管路堵塞。可以拆下來(lái)用適量濃度的硝酸進(jìn)行浸泡和不斷用水進(jìn)行沖洗，必要時(shí)也可進(jìn)行超聲處理。（根據(jù)污染程度延長(zhǎng)浸泡和清洗時(shí)間或增大硝酸的濃度）

（3）??? 過(guò)濾白頭：可將過(guò)濾白頭取出，用10%異丙醇超聲半個(gè)小時(shí)，再用超純水沖洗干凈。必要時(shí)更換新的。

（4）??? 單向閥芯：此處堵了會(huì)導(dǎo)致泵壓力不穩(wěn)，有氣泡，嚴(yán)重時(shí)泵不過(guò)液，清洗不能排除故障時(shí)，更換新的配件。

（5）??? 自動(dòng)進(jìn)樣器針座：此處堵了會(huì)造成進(jìn)樣口漏液，反沖不能解決故障時(shí)，更換針座。

（6）??? 色譜柱：如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強(qiáng)保留的物質(zhì)導(dǎo)致堵塞，則要用比現(xiàn)在流動(dòng)相更強(qiáng)洗脫能力的流動(dòng)相沖至壓力正常。假如按上面的方法長(zhǎng)時(shí)間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上，用流動(dòng)相沖洗柱子。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以盡量少用。必要時(shí)更換新柱子。

（7）??? 流通池：分析污染的物質(zhì)是什么，對(duì)癥下藥。例如：如果只是緩沖鹽結(jié)晶導(dǎo)致堵塞，可以使用熱水沖洗系統(tǒng)。用上述方式無(wú)法解決時(shí)，可以嘗試使用熱水不斷變換管路連接方式（正沖、反沖）沖洗系統(tǒng)。另外，還有一種方式非必要一般不建議使用：在不連接色譜柱的情況下，先用超純水沖洗20min，然后用5%硝酸沖洗2個(gè)小時(shí)，最后再用超純水沖洗至流出液體為中性即可。以上程序均建議在流通池設(shè)置壓力限制（比最大耐受壓力低5~10bar）條件下使用。如上述方法不果，就需要更換新的配件。

預(yù)防液相色譜儀堵塞的方法（包括但不限于以下）

溶劑：

色譜使用的溶劑必須是色譜純，并且使用前需要抽濾。使用時(shí)務(wù)必蓋好瓶蓋。
水相需要使用二級(jí)以上的蒸餾水/18.2MΩ，并且每天都需要更換。
使用乙腈作為流動(dòng)相時(shí)，注意避光，使用棕色瓶存放，避免乙腈聚合。
僅使用干凈的高硼硅酸鹽玻璃瓶。
配置夠1-2天使用的流動(dòng)相即可。

樣品：

保證樣品充分溶解，樣品瓶干凈沒(méi)有顆粒物。
樣品建議使用0.2μm濾膜過(guò)濾，或者高速離心取上清液進(jìn)樣。

泵準(zhǔn)備:

Purge：除去通道中舊溶劑、鹽沉積或顆粒物（每個(gè)通道4ml/min，3分鐘）。
更換流動(dòng)相時(shí)，注意泵腔和色譜柱里鹽溶液和有機(jī)相是否互溶，使用高比例水相（比如?80%水相）過(guò)渡鹽相和有機(jī)相。
柱塞桿清洗：10%異丙醇，不回收使用，每次開(kāi)機(jī)確保柱塞桿清洗液充足。
打開(kāi)排氣閥5ml/min純水壓力正常情況下四元泵10bar以內(nèi)（二元泵20bar以內(nèi)）。如果壓力高，則需要拆下過(guò)濾白頭?？搭伾欠癜l(fā)黑發(fā)黃。過(guò)濾白頭上有黑碎屑，則需考慮換泵密封墊。過(guò)濾白頭上粘糊糊，則需考慮體系是否長(zhǎng)菌，可將過(guò)濾白頭進(jìn)行超聲清洗或者更換。
使用四元泵時(shí)，緩沖鹽流動(dòng)相/水相置于A/D通道中，有機(jī)相置于B/C通道中。

進(jìn)樣器：

根據(jù)分析化合物極性大小，選擇最適合的洗針溶液。
更換洗針溶液后，右擊進(jìn)樣器?prime?洗針管路?60s，分析方法設(shè)置洗針程序。

柱溫箱：

選用恰當(dāng)?shù)慕宇^連接不同廠家色譜柱，或使用箍錐前端可以伸縮的萬(wàn)能接頭來(lái)適配不同廠家色譜柱，柱后采用紅色?Peek?管線接入檢測(cè)器入口。
流動(dòng)相有鹽溶液時(shí)，首先用高比例水相過(guò)渡色譜柱，然后讓鹽溶液進(jìn)入色譜柱，避免鹽析堵塞。

檢測(cè)器準(zhǔn)備：